亚欧洲精品在线视频免费观看,亚洲精华国产精华液,国产美女裸体无遮挡免费视频,色婷婷久久啪啪一区二区

免費咨詢熱線:
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)中心 > PCR反應體系包括什么

PCR反應體系包括什么

 更新時間:2024-06-06 點擊量:1145
  PCR是一種選擇性體外快速擴增DNA片段的方法。在體外以類似于細胞內(nèi)DNA的半保留復制過程,以擬擴增的模板DNA分子,與模板DNA互補的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應體系,經(jīng)過重復地變性一退火一延伸三步,擴增新的目的DNA鏈,這個過程通過控制反應體系的溫度來實現(xiàn)。那么你知道PCR反應體系包括什么嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  一、模板(template)
 
  模板即擴增用的DNA,可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA(如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等),但必須符合兩個條件:一是純度必須較高,二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴增的目的基因或特異片段,如診斷病人是否攜帶有突變基因時,其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對模板DNA的純度不要求很高,但應盡量不含有對PCR反應有抑制作用的雜質(zhì)存在,如蛋白酶、核酸酶、Taq DNA聚合酶抑制劑、能與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。
 
  二、引物(primers)
 
  人工合成的一對引物可以分別與兩條模板DNA互補結(jié)合的寡核苷酸序列,其中一條稱為上游引物,另一條稱為下游引物。引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。引物濃度一般為0.1~0.5umol/L,濃度過高會引起錯配和非特異擴增,濃度過低則得不到產(chǎn)物或產(chǎn)量過低。引物長度一般為15~30bp,引物過長或過短都會降低特異性。其3'末端一定要與模板DNA配對,末位堿基最好選用A、C、G(因T錯配也能引發(fā)鏈的延伸)。引物GC占45%~55%,堿基應盡量隨機分布,避免嘧啶或嘌呤堆積,兩引物之間不應有互補鏈存在,不能與非目的擴增區(qū)有同源性。
 
  三、底物(dNTP)
 
  dNTP包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP。dNTP溶液呈酸性,使用時應配成高濃度后,以1mol/L NaOH或1mol/L Tris-HCl的緩沖液將其pH調(diào)節(jié)至7.0~7.5,小量分裝,-20℃冰凍保存。一般存儲濃度為10mo/L,各成分以等當量配制,反應終濃度為20~200umol/L,如其中任何一種濃度不同于其他幾種時(偏高或偏低),就會引起錯配。高濃度可加速反應,但同時增加錯誤摻入和實驗成本;低濃度可提高精確性,而反應速度會降低。
 
  四、PCR緩沖液(PCR buffer)
 
  緩沖液的成分最為復雜,除水外一般包括四種有效成分:①緩沖體系,一般使用HEPES或MOPS緩沖體系;②一價陽離子,一般采用鉀離子,但在特殊情況下也可使用銨根離子;③二價陽離子,即鎂離子,根據(jù)反應體系確定,除特殊情況外不需調(diào)整;④輔助成分,常見的有DMSO、甘油等,主要用來保持酶的活性和幫助DNA接觸纏繞結(jié)構(gòu)。
 
  更多有關(guān)PCR反應體系包括什么,請聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司!
国产毛片精品一区二区色欲黄a片| 国产片和外国大片| 男男互攻互受h啪肉np文| 窝窝午夜精品一区二区| 欧美av色香蕉一区二区蜜桃电影| 亚洲精品巨爆乳无码大乳巨| gogogo日本免费观看| 婷婷综合另类小说色区| 日韩精品视频一区二区三区| 无码人妻精品一区二区三区东京热| 国产天美传媒一起又看流星雨| 我的私人女教师3| 东京热av人妻无码专区| 成人性生交大片免费看中国| 美女做爰a片毛片aaaa| 婷婷五月综合缴情在线视频| 99这里只有精品| 绝味儿媳妇txt| 性生交大片免费看| 国产成人精品亚洲线观看| 日韩精品无码一区aaa片| 欧美喷潮久久久xxxxx| 婷婷丁香五月久久综合啪啪图区| 日本美女图片| 性妇bbw搡bbbb搡bbbb| 几个东北熟妇的性经历| 少妇高潮一区二区三区99| 色欲色香天天天综合www| 西西gogo顶级艺术人像摄影| 把腿张开开被添死去活来| 久久久久国产一区二区三区| 精品亚洲一区二区三区四区五区 | 国产真人无遮挡作爱免费视频| 白嫩的18sex少妇hd| gogo西西人体做爰大胆视频图| 黑加白blackedhd| 老女人重囗味456| 特黄特色大片免费播放器图片 | 日韩人妻无码精品无码中文字幕 | 与80岁老太做爰a片免费看| 18禁高潮出水呻吟娇喘蜜芽|